流式細胞分選抗體的常規(guī)處理方法

　　流式細胞分選是指將組織分散制成細胞懸液后從中獲取目的細胞的過程。細胞純化更進一步強調(diào)從原代培養(yǎng)前成分混雜的異質(zhì)性細胞懸液中或者從培養(yǎng)物中獲得單一類型細胞的過程。通過細胞的分離和純化過程，使培養(yǎng)物成為單一類型培養(yǎng)物，甚至是遺傳特性*一致的培養(yǎng)物，后者即細胞系。許多情況下，細胞分離和純化并不是**的，培養(yǎng)物中只能達到以某種細胞為主的程度，所以也成稱為富集。

 

　　分離和純化細胞的過程不僅僅在原代培養(yǎng)之前進行的，有時分離和純化細胞的過程還貫穿于原代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)的過程中，甚至是主要依賴培養(yǎng)過程實現(xiàn)分離和純化細胞的目的。培養(yǎng)物中細胞成分是否單一或者目的細胞在培養(yǎng)物中的比例如何，常是衡量某一培養(yǎng)工作是否成功的重要指標。細胞分離純化的方法有密度梯度離心技術(shù)、逆流淘析分離技術(shù)、利用細胞表面標志分離純化細胞的方法等。

 

　　流式細胞分選抗體的常規(guī)處理方法：

　　1、分選外周血，骨髓時：加抗凝劑，去紅細胞；

　　2、分選組織時，機械分離或膠原酶；

　　3、培養(yǎng)細胞，使用胰酶消化。

　　在實際細胞分離中，因為流式分選的辦法價格相對比較昂貴，實驗者一般都會采取別的方法分離細胞。下面列出來幾種其它細胞分離方法不能替代的情況，這些情況下必須進行流式的細胞分選：

　　1、要求目標細胞群有*的純度(95%-100%)；

　　2、需要分離低密度表面受體/抗原的細胞；（弱陽性細胞)；

　　3、需要根據(jù)表面受體密度的差別來分離不同細胞；（根據(jù)免疫表型的分選，抗體親和力進化等）；

　　4、需要依據(jù)多色熒光標記來分選細胞；

　　5、根據(jù)某些細胞內(nèi)部標志，如DNA含量、胞內(nèi)抗原等分離細胞；

　　6、多孔板分選。如單克隆分選，在96孔板每個孔中精確的分選進1個細胞；

　　7、需要分選極低含量的細胞（如0.001%或更低）。流式可以分選出百萬分之一的稀有細胞。