如何選擇緩沖溶液？

三羥甲基氨基甲烷（Tris）是一種應(yīng)用非常廣泛的有機(jī)試劑。它及其衍生物被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備，可用于制作藥物、有機(jī)合成、生物緩沖劑等。其中在生化實(shí)驗(yàn)中，許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都需要用Tris作為生物緩沖劑。那么你知道該如何選擇緩沖溶液嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

TBS即Tris緩沖鹽水，是Tris-HCl緩沖鹽溶液，為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。因?yàn)?/span>Tris堿的堿性較強(qiáng)，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液；對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。

但是緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大，溫度效應(yīng)也大，而且易吸收空氣中的CO2，所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封，此緩沖液對(duì)某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用，所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。

TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl，NaCl，tween20這三種物質(zhì)，是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì)，并且維持一個(gè)接近的天然環(huán)境。其中，Tween是一種離子表面活性劑，可加速抗體非特異性結(jié)合的分離。因?yàn)?/span>Western Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合，孵育過(guò)程中，抗體能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高，在孵育抗體后，混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的抗體洗掉，增加特異性。

TE緩沖液 Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液"，TE緩沖液是弱堿性，對(duì)DNA的堿基有保護(hù)性，因此，DNA在TE中的穩(wěn)定性較好，不易被破壞完整性或產(chǎn)生開(kāi)環(huán)及斷裂，TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存。

將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸，則獲得“TAE緩沖液"（Tris/Acetate/EDTA），TAE是使用zui廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量，且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率也較快，電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果。此外，回收DNA片段時(shí)也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。但是，TAE的缺點(diǎn)是緩沖容量小，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換，否則長(zhǎng)時(shí)間電泳是不可選用的。

TBE緩沖液 丙烯酰胺實(shí)驗(yàn)以及瓊脂糖凝膠電泳將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成硼酸則獲得“TBE緩沖液"（Tris/Borate/EDTA）。TBE Buffer是分子實(shí)驗(yàn)中常用的緩沖液，由Tris和硼酸、EDTA組成，所以簡(jiǎn)稱為TBE buffer。該緩沖液常用于聚電泳實(shí)驗(yàn)中。TBE Buffer為無(wú)色澄清液體，可在室溫中儲(chǔ)存，25℃時(shí)的pH值為8.2~8.4。在使用時(shí)要注意的是TBE Buffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶的活性。

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