Transwell遷移實驗步驟

一、細胞遷移

     細胞遷移 (cell migration) 也稱為細胞爬行、細胞移動或細胞運動，是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一，是機體正常生長發育的生理過程，也是活細胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發育、血管生成、傷口愈合、免疫反應、炎癥反應、動脈粥樣硬化、癌癥轉移等過程中都涉及細胞遷移。細胞遷移實驗是研究細胞在體外條件下移動能力的一種實驗方法，廣泛應用于細胞生物學、腫瘤學和免疫學等領域。細胞遷移實驗基于細胞對環境變化的反應能力，這些變化可以是物理的（如空間間隙）或化學的（如梯度差）。實驗目的是模擬并觀察細胞如何在這些條件變化下移動，從而了解細胞遷移的機制和影響因素。

二、Transwell細胞遷移實驗

1、簡介

Transwell實驗，也稱為Transwell遷移或侵襲測定實驗，是一種用于細胞生物學和分子生物學的實驗室技術，用于研究細胞通過多孔膜的運動。它通常用于研究細胞對各種刺激（如生長因子、趨化因子或細胞外基質成分）的遷移、趨化性和侵襲。Transwell實驗對于評估細胞通過多孔屏障遷移或侵襲的能力特別有用，多孔屏障模擬細胞必須穿過體內組織的生理條件。Transwell實驗涉及Transwell小室（插入物）和孔板，它們是一種由分隔兩個隔室的滲透膜組成的裝置。 通常，頂部室充滿細胞，而底部室包含化學引誘劑或誘導細胞遷移的物質。多孔膜允許細胞通過膜上的小孔從頂部室遷移到底部室。

2、步驟

1）在24孔板中放置Transwell插入物。向每個Transwell上室添加適量無血清培養基（通常為100-200 µL），向下室添加含有化學誘導劑的培養基（通常為600-800 µL）。

2）用無菌PBS清洗培養的細胞。使用胰酶消化細胞，并加入含有無血清培養基的管中中止消化。計數細胞，并調整細胞懸液至適當濃度（例如1×105 cells/mL）。

3）向Transwell上室中添加適量的細胞懸液（通常為100-200 µL）。小心處理以避免氣泡形成。

4）將Transwell板放入37°C、5% CO2培養箱中孵育24-48小時，以允許細胞遷移。

5）孵育結束后，取出Transwell插入物。

6）用無菌PBS輕輕清洗上室，去除未遷移的細胞。

7）用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室遷移的細胞，固定時間通常為10-15分鐘。

8）用PBS清洗并染色（如0.1%結晶紫染色或DAPI染色）。

9）用棉簽擦去上室膜上的未遷移細胞。使用顯微鏡觀察下室膜上的遷移細胞，并拍攝圖像。計數多個視野中的遷移細胞數，計算平均值。

10）匯總遷移細胞數量，進行統計分析，繪制細胞遷移圖。

結果圖展示

注意事項請點擊跳轉：Transwell實驗注意事項

三、實驗中會用到的PBS推薦

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